解放军医学杂志

作者：陶正贵,杜静虎,田葵,王东华,龚伟,陈满宇,

单位：1湖北文理学院附属医院/襄阳市中心医院普外科，湖北 襄阳 441000 2湖北文理学院附属医院/襄阳市中心医院肿瘤科，湖北 襄阳 441000

关键词：胃癌,轴突导向蛋白4D,自噬,上皮-间质转化

基金：Scientific Research Project of Hubei Health and Education Department(Q20132605)；湖北省教育厅科研项目(Q20132605)

目的 探讨沉默轴突导向蛋白4D(Sema4D)对胃癌细胞SGC-7901生长、自噬及上皮-间质转化的影响。方法 将SGC-7901细胞随机分为对照组、shRNA-NC组、Sema4D-shRNA1组、Sema4D-shRNA2组与Sema4D-shRNA3组，构建shRNA Sema4D载体转染至SGC-7901细胞。采用RT-PCR检测各组Sema4D mRNA表达水平；采用克隆形成实验检测细胞克隆形成率；流式细胞仪检测细胞凋亡情况；显微镜观察上皮-间质转化形态学变化；Western blotting检测Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved caspase-3、Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、E-cadherin、N-cadherin、波形蛋白表达水平。结果 RT-PCR检测结果显示，与对照组比较，Sema4D-shRNA1组、Sema4D-shRNA2组和Sema4D-shRNA3组Sema4D mRNA表达水平均明显降低，且Sema4D-shRNA3组明显低于Sema4D-shRNA1组和Sema4D-shRNA2组(P<0.05)，选择Sema4D-shRNA3进行后续试验。克隆形成实验结果显示，与对照组比较，Sema4D-shRNA3组克隆形成率明显降低(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示，与对照组比较，Sema4D-shRNA3组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。Western blotting检测结果显示，与对照组比较，Sema4D-shRNA3组Ki-67、PCNA、p62、N-cadherin、波形蛋白表达水平明显降低，Beclin1、E-cadherin蛋白表达水平明显升高，Bax/Bcl-2、cleaved caspase-3/caspase-3、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显升高(P<0.05)。显微镜观察可见Sema4D-shRNA3组细胞上皮-间质转化受到抑制。结论 shRNA Sema4D可抑制SGC-7901细胞的增殖、自噬、上皮-间质转化，促进其凋亡。

来源：2021年第1期

《解放军医学》期刊编辑部

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