解放军医学杂志

作者：夏红,杨翔,陈烨,李虎,褚桂芬

单位：广州市番禺区中心医院妇科，广州 511040

关键词：环状RNA,外泌体,宫颈癌,增殖,迁移

基金：Guangzhou Science and Technology Plan Project(201904010363)；广州市科技计划项目(201904010363)

目的 分析环状RNA 0087432(hsa_circ_0087432)在宫颈癌患者血清外泌体中的表达，探讨其与宫颈癌转移可能存在的关系。方法 收集广州市番禺区中心医院2019年6月—2020年6月诊断为宫颈鳞癌且术前未行放化疗的30例患者的宫颈癌组织及血清作为实验组，另将30例未患宫颈癌的女性正常宫颈组织及血清作为对照组。采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测hsa_circ_0087432在宫颈癌患者与健康人宫颈组织和血清外泌体中的表达水平。通过质粒转染Siha细胞以过表达hsa_circ_0087432，将Siha细胞依不同处理分为3组：control组(未转染质粒)，vector组(转染pLC5-ciR)及hsa_circ_0087432组(转染hsa_circ_0087432-pLC5-ciR)，并提取各组外泌体；采用透射电镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)及Western blotting检测外泌体表征。将人脐静脉内皮细胞按不同处理分为3组：control-Exs组(Siha细胞来源外泌体)、vector-Exs组(vector组Siha细胞来源外泌体)、hsa_circ_0087432-Exs组(hsa_circ_0087432组Siha细胞来源外泌体)，采用CCK-8试剂盒检测外泌体对人脐静脉内皮细胞增殖的影响，采用划痕实验及Transwell检测外泌体对人脐静脉内皮细胞迁移的影响。结果 电镜下观察结果显示，Siha细胞的外泌体大部分呈椭圆形或圆形，粒径分析显示其直径大小分布在30~150 nm；Western blotting检测结果显示，两组囊泡中的CD9、CD81及CD63表达均呈阳性；qPCR结果显示，实验组宫颈组织hsa_circ_0087432表达量明显高于对照组(4.03±1.51 vs. 1.00±0.26，P<0.01)，且血清外泌体中hsa_circ_0087432表达量也明显高于对照组(1.97±0.04 vs. 1.02±0.23，P<0.01)。CCK-8检测结果显示，hsa_circ_0087432-Exs可明显促进人脐静脉内皮细胞增殖(1.57±0.04 vs. 1.09±0.11，P<0.05)。划痕实验结果显示，干预12 h后，circ_0087432-Exs组的迁移面积占比高于control-Exs组(24.66%±2.92% vs. 15.01%±3.12%，P<0.05)，且24 h后hsa_circ_0087432-Exs组的迁移面积占比明显高于control-Exs组(74.84%±13.22% vs. 38.70%±2.12%，P<0.01)。Transwell检测结果也显示，与vector-Exs组及control-Exs组比较，hsa_circ_0087432-Exs组迁移细胞数量明显增多，差异有统计学意义[分别为(1218.00±103.53)个、(1044.00±103.79)个、(1755.00±97.35)个，P<0.05]。结论 hsa_circ_0087432在宫颈癌患者血清外泌体中呈高表达，且过表达hsa_circ_0087432的宫颈癌细胞来源的外泌体可促进人脐静脉内皮细胞增殖与迁移。

来源：2021年第4期

《解放军医学》期刊编辑部

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