解放军医学杂志

作者：张孝璐,杨兰,孙岩松,徐东平,李晓峰,刘妍,李浩,

单位：1病原微生物生物安全国家重点实验室，军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所，北京 100071 2解放军总医院第五医学中心感染病医学部，北京 100039

关键词：乙型肝炎病毒,DNA修复,计算生物学,转录组测序,恩替卡韦,HepG2.A64细胞系

基金：National Natural Science Foundation of China(81573676)；国家自然科学基金(81573676)；Natural Science Foundation of Beijing(7194302)；北京市自然科学基金(7194302)

目的 分析恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒(ETV-r HBV)稳定转染前后宿主细胞转录组水平的基因差异表达，为后续开展HBV感染相关机制研究提供基础数据和参考。方法 对ETV-r HBV稳定转染细胞株(HepG2.A64)及其原始背景细胞株(HepG2)进行转录组测序(n=3)，利用DESeq2软件以|log2 Fold Change|>2、padj<0.05为差异基因筛选条件对测序结果进行差异基因筛选；利用clusterProfiler软件对差异基因进行GO功能富集分析和KEGG功能富集分析。采用RT-qPCR及Western blotting分别检测HBV稳定转染前后宿主细胞DNA修复相关基因mRNA及蛋白的表达水平。结果 转录组测序结果显示，与HepG2细胞系相比，ETV-r HBV稳定转染的HepG2.A64细胞系共有613个基因存在差异表达，其中401个上调，212个下调(padj<0.05)，GO和KEGG富集分析结果显示，差异表达基因主要参与炎症反应、PI3K/Akt信号通路、PPAR信号通路、NF-κB信号通路以及免疫相关的生物学过程。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示，与HepG2细胞系相比，HepG2.A64细胞系中RAD52和XRCC2 mRNA表达量分别下降68.96%±7.59%、69.58%±6.32%，RAD52和XRCC2蛋白表达量分别下降69.93%±3.88%、26.47%±12.7%，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 与原始细胞系HepG2相比，ETV-r HBV稳定转染的HepG2.A64细胞系在转录水平出现大量差异表达基因，同时HepG2.A64细胞系中DNA修复相关基因表达量出现下调。

来源：2021年第5期

《解放军医学》期刊编辑部

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