解放军医学杂志

作者：汤月良,邓冠群

单位：广州市增城区人民医院普通外科，广州 511300

关键词：伊维菌素,奥沙利铂,结肠癌,耐药

基金：Guangdong Medical Science and Technology Research Fund Project(A2019195)；广东省医学科学技术研究基金(A2019195)

目的 探讨伊维菌素(Ive)对奥沙利铂(L-OHP)抗结肠癌HCT116/L-OHP细胞的增效作用及其机制。方法 利用L-OHP低浓度梯度递增和低浓度L-OHP(4 μmol/L)持续培养的方法建立结肠癌HCT116/L-OHP细胞模型，设置空白对照组，L-OHP 25 μmol/L组以及L-OHP 25 μmol/L联合1、2、4、8 μmol/L Ive组，采用MTT法检测细胞活力；设置空白对照组、L-OHP 25 μmol/L组、L-OHP+Ive 2 μmol/L组及L-OHP+Ive 4 μmol/L组，采用克隆实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布情况，Western blotting检测核因子κB p65(NF-κB p65)、孕烷X受体(PXR)和P-糖蛋白(P-gp)的表达水平。采用LPS诱导构建NF-κB p65高表达的结肠癌HCT116/L-OHP细胞模型(设置空白对照组、LPS组、LPS+L-OHP组、LPS+L-OHP+Ive 2 μmol/L组及LPS+L-OHP+Ive 4 μmol/L组)，采用慢病毒转染构建PXR高表达的结肠癌HCT116/L-OHP细胞模型(设置空白对照组、Ad-PXR组、Ad-PXR+L-OHP组、Ad-PXR+L-OHP+Ive 2 μmol/L组及Ad-PXR+L-OHP+Ive 4 μmol/L组)，Western blotting检测各组细胞NF-κB p65、PXR和P-gp蛋白的表达水平。20只裸鼠皮下注射HCT116/L-OHP细胞建立结肠癌耐药细胞移植瘤模型，设置空白对照组、L-OHP组、Ive组及Ive+L-OHP组，每组5只，计算肿瘤体积，测量肿瘤重量，采用免疫组化法检测肿瘤组织中NF-κB p65、PXR和P-gp蛋白的表达情况。结果 Ive可增效L-OHP抑制结肠癌HCT116/L-OHP细胞的增殖和克隆形成(P<0.05)，并促进结肠癌HCT116/L-OHP细胞凋亡和S期细胞阻滞(P<0.05)。Western blotting检测结果显示，L-OHP+Ive 2 μmol/L组和L-OHP+Ive 4 μmol/L组结肠癌HCT116/L-OHP细胞NF-κB p65、PXR和P-gp蛋白的表达水平低于空白对照组，且L-OHP+Ive 4 μmol/L组低于L-OHP组(P<0.05)。在NF-κB p65高表达的HCT116/L-OHP细胞模型中，LPS+L-OHP+Ive 2 μmol/L组和LPS+L-OHP+Ive 4 μmol/L组NF-κB p65、PXR和P-gp蛋白的表达水平低于LPS组(P<0.05)。在PXR高表达的HCT116/L-OHP细胞模型中，Ad-PXR+L-OHP+Ive 2 μmol/L组和Ad-PXR+L-OHP+Ive 4 μmol/L组NF-κB p65、PXR和P-gp的表达水平低于Ad-PXR组和Ad-PXR+L-OHP组，且Ad-PXR+L-OHP+Ive 4 μmol/L组低于Ad-PXR+L-OHP+Ive 2 μmol/L组(P<0.05)。体内实验结果显示，Ive可协同L-OHP抑制HCT116/L-OHP细胞移植瘤的生长(P<0.05)。免疫组化检测结果显示，Ive组、L-OHP组和Ive+L-OHP组肿瘤组织中NF-κB p65、PXR及P-gp蛋白的相对表达密度低于空白对照组，且L-OHP组、Ive+L-OHP组低于Ive组，Ive+L-OHP组低于L-OHP组(P<0.05)。结论 Ive对L-OHP抗结肠癌HCT116/L-OHP细胞有增效作用，其作用机制可能是通过抑制NF-κB p65/PXR信号通路的表达，从而减弱P-gp蛋白对L-OHP耐药的介导作用。

来源：2021年第6期

《解放军医学》期刊编辑部

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