解放军医学杂志

作者：徐汪洋,王业杨,张辉,黄丽珊

单位：广东省第二人民医院骨科中心，广州 515000

关键词：脊髓损伤,星形胶质细胞,氧糖剥夺/再灌注,Tribbles同源蛋白3

基金：Natural Science Foundation of Guangdong Province(2018A0303130183)；广东省自然科学基金(2018A0303130183)；Youth Foundation of Guangdong Second Provincial General Hospital(YQ2017-011)；广东省第二人民医院院内青年基金(YQ2017-011)；Doctoral Workstation Foundation of Guangdong Second

目的 探讨Tribbles同源蛋白3(TRB3)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的大鼠脊髓星形胶质细胞损伤的影响。方法 分离培养新生SD大鼠的脊髓星形胶质细胞，设置对照组(不做任何处理)、OGD/R组(进行OGD/R处理)，采用Real-time PCR和Western blotting分别检测TRB3 mRNA和蛋白的表达；设置对照组(不做任何处理)、Scramble组(感染阴性对照慢病毒)与shTRB3组(感染TRB3 shRNA慢病毒)，采用Real-time PCR和Western blotting分别检测TRB3 mRNA和蛋白的表达，确定TRB3 shRNA慢病毒干扰效率；设置对照组(正常培养)、OGD/R组(进行OGD/R处理)、shTRB3组(感染TRB3 shRNA慢病毒)、Scramble组(感染阴性对照慢病毒)、OGD/R+shTRB3组(感染TRB3 shRNA慢病毒后，进行OGD/R处理)与OGD/R+Scramble组(感染阴性对照慢病毒后，进行OGD/R处理)，采用流式细胞术检测细胞凋亡情况，CCK-8法检测细胞活力，乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒测定LDH漏出率，硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量，黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性，ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平，Western blotting检测核因子κB(NF-κB) p65蛋白表达水平。使用NF-κB p65激动剂白桦脂酸(BA)20 μmol/L处理OGD/R组和OGD/R+shTRB3组细胞，采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 Real-time PCR和Western blotting检测结果显示，OGD/R处理后，脊髓星形胶质细胞中TRB3 mRNA(2.15±0.12 vs. 1.00±0.05)和蛋白(2.10±0.16 vs. 1.00±0.08)表达水平明显升高(P<0.05)；与对照组比较，shTRB3组星形胶质细胞中TRB3 mRNA(0.30±0.07 vs. 1.00±0.10)和蛋白(0.30±0.04 vs. 1.00±0.06)表达水平明显降低(P<0.05)，表明TRB3 shRNA慢病毒感染成功。与对照组比较，OGD/R组、OGD/R+Scramble组星形胶质细胞活性、SOD活性及细胞核NF-κB p65蛋白表达水平明显降低，LDH漏出率、MDA含量、TNF-α水平、IL-1β水平及细胞凋亡率明显增高(P<0.05)；与OGD/R组和OGD/R+Scramble组比较，OGD/R+shTRB3组星形胶质细胞活性、SOD活性及细胞核NF-κB p65蛋白表达水平明显增高，LDH漏出率、MDA含量、TNF-α水平、IL-1β水平及细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与OGD/R组比较，BA处理能明显提高细胞凋亡率(36.15%±0.87% vs. 24.70%±1.05%，P<0.05)；与OGD/R+shTRB3组比较，BA处理能逆转TRB3 shRNA慢病毒感染对OGD/R诱导的细胞凋亡的抑制作用(22.00%±1.04% vs. 13.91%±1.20%，P<0.05)。结论 TRB3沉默可能通过阻断NF-κB通路而减轻OGD/R诱导的大鼠脊髓星形胶质细胞损伤。

来源：2021年第9期

《解放军医学》期刊编辑部

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