解放军医学杂志

作者：秦高平,孙要文,郭亚东,李建武,程亮,韩峰,宋勇,

单位：1陕西省人民医院烧伤整形医学美容外科，西安 710068 2陕西省人民医院肝胆外科，西安 710068

关键词：组织分化诱导非编码RNA,葡萄球菌核酸酶结构域蛋白1,RNA甲基化,RNA稳定性,细胞增殖,成纤维细胞,瘢痕疙瘩

目的 探讨葡萄球菌核酸酶结构域蛋白1(SND1)与组织分化诱导非编码RNA(TINCR)的相互作用及其对TINCR表达水平和瘢痕疙瘩生长的影响。方法 收集2016年6月—2018年5月在陕西省人民医院接受治疗的Ⅱ、Ⅲ度烧伤患者的瘢痕疙瘩组织样本(n=27)。运用生物信息学方法预测TINCR序列中的RNA甲基化位点；培养人原代正常皮肤成纤维细胞(HFs)和瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)，设置HFs组和KFs组。取对数生长期KFs，设置：(1)对照组、空载组及甲基转移酶样蛋白3(METTL3)过表达组；(2)对照组和3-脱氮基腺苷(DAA)组；(3)对照组、SND1重组蛋白组及SND1重组蛋白+DAA组。采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测HFs和KFs中TINCR的相对表达水平，甲基化RNA免疫沉淀技术(MeRIP)联合RT-qPCR检测TINCR的甲基化水平，Western blotting检测SND1和METTL3蛋白的相对表达水平，放线菌素D处理联合RT-qPCR检测TINCR残留水平，CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力。取18只BALB/c裸鼠，构建瘢痕疙瘩异种移植模型，随机分为瘢痕疙瘩组、瘢痕疙瘩+SND1重组蛋白组及瘢痕疙瘩+SND1重组蛋白+DAA组，每组6只，采用HE染色观察瘢痕疙瘩组织生长情况，免疫组化染色和Western blotting检测SND1在瘢痕疙瘩组织中的表达水平。结果 TINCR第三外显子含有7个潜在的RNA甲基化位点。与HFs相比，KFs中TINCR相对表达水平(5.43±0.35 vs. 1.00±0.11，P<0.01)和甲基化水平(19.73%±1.56% vs. 10.25%±1.13%，P<0.01)均明显升高，SND1和METTL3蛋白相对表达水平明显增高(P<0.01)，甲基化的TINCR与SND1和METTL3均有结合。与空载组相比，METTL3过表达可促进METTL3 mRNA和蛋白的表达(mRNA：6.03±0.55 vs. 1.09±0.09，P<0.01；蛋白：4.33±0.35 vs. 0.96±0.08，P<0.01)、增高TINCR甲基化水平(32.89%±2.88% vs. 19.04%±1.72%，P<0.01)和相对表达水平(4.65±0.32 vs. 1.00±0.10，P<0.01)。与对照组相比，DAA处理可降低TINCR的稳定性[(8.50±1.13) h vs. (12.90±1.41) h，P<0.001]和甲基化水平(7.43%±0.55% vs. 18.88%±1.76%，P<0.01)，抑制KFs的活力和克隆形成能力(P<0.01)。与对照组相比，SND1重组蛋白处理可增加TINCR的稳定性[(23.95±1.25) h vs. (13.10±1.33) h，P<0.01]、细胞活力和克隆形成能力(P<0.01)，但对TINCR甲基化水平(20.15%±1.74% vs. 19.04%±1.77%，P>0.05)无明显影响；DAA处理可消除SND1重组蛋白对TINCR稳定性[(12.00±1.21) h vs. (23.95±1.44) h，P<0.01]、细胞活力和克隆形成能力的影响(P<0.01)。与瘢痕疙瘩组相比，瘢痕疙瘩+SND1重组蛋白组真皮层有大量成纤维细胞和胶原纤维，瘢痕疙瘩组织中SND1阳性细胞百分比(63.43%±3.32%vs. 21.16%±4.67%，P<0.01)和蛋白相对表达水平(2.54±0.13 vs. 1.00±0.10，P<0.01)明显增高；而经DAA处理后，瘢痕疙瘩组织中有大量疏松的胶原纤维，SND1阳性细胞百分比(38.52%±6.88% vs. 63.43%±3.32%，P<0.01)和蛋白表达水平(1.07±0.09 vs. 2.54±0.13，P<0.01)明显降低。结论 KFs中TINCR呈高甲基化水平，SND1可识别并结合TINCR的甲基化位点，增强TINCR的稳定性，促进TINCR介导的瘢痕疙瘩生长。

来源：2021年第11期

《解放军医学》期刊编辑部

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