解放军医学杂志

作者：翟志恒,田杨,周玉妮,宋玉成

单位：济宁医学院济宁市精神病防治院，山东济宁 272051

关键词：阿尔茨海默病,长链非编码RNA,核富集转录本1,PI3K/Akt

基金：Supporting Fund for Teachers' Research of Jining Medical College(JYFC2019FKJ032)；济宁医学院教师科研扶持基金(JYFC2019FKJ032)

目的 探讨lncRNA NEAT1通过激活PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)模型细胞凋亡的影响及可能机制。方法 以0、5、10、20 μmol/L Aβ25-35诱导PC12细胞，构建AD细胞模型。用5 μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞，并于24、48、72 h采用qRT-PCR检测lncRNA NEAT1相对表达水平。取PC12细胞，(1)设置对照组、敲降lncRNA NEAT1组、si-NC组、空载体组及过表达lncRNA NEAT1组，对照组不做任何处理，其余4组分别用含si-lncRNA NEAT1、si-NC、pcDNA3.1-NC、pcDNA3.1-lncRNA NEAT1的Opti-MEM培养基培养并转染8 h，然后使用20 μmol/L Aβ25-35处理。采用qRT-PCR检测lncRNA NEAT1相对表达水平；CCK-8法检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡情况，并以G1和G2期细胞比例反映细胞增殖情况；ELISA法检测细胞上清中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。(2)设置对照组、空载体组及过表达lncRNA NEAT1组，采用Western blotting检测p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达水平。(3)设置对照组、si-NC组、敲降lncRNA NEAT1组、空载体组、过表达lncRNA NEAT1组及过表达lncRNA NEAT1+LY294002组，过表达lncRNA NEAT1+LY294002组细胞转染pcDNA3.1-lncRNA NEAT1后，加入10 μmol/L PI3K通路抑制剂LY294002处理，采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 不同浓度的Aβ25-35均可明显抑制lncRNA NEAT1的表达，且呈浓度依赖性(P=0.001)。与空载体组相比，过表达lncRNA NEAT1组lncRNA NEAT1相对表达水平、细胞增殖率、G2期细胞比例明显增高，细胞凋亡率、G1期细胞比例明显降低(P<0.05)；与si-NC组相比，敲降lncRNA NEAT1组lncRNA NEAT1相对表达水平、细胞增殖率、G2期细胞比例明显降低，细胞凋亡率、G1期细胞比例明显升高(P<0.05)。ELISA检测结果显示，与空载体组相比，过表达lncRNA NEAT1组细胞上清中IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平明显降低(P<0.05)；与si-NC组相比，敲降lncRNA NEAT1组细胞上清中IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平明显升高(P<0.05)。Western blotting检测结果显示，与空载体组相比，过表达lncRNA NEAT1组信号通路相关蛋白p-PI3K、p-Akt相对表达水平增高(p-PI3K：0.86±0.05 vs. 0.15±0.02，P=0.003；p-Akt：0.86±0.06 vs. 0.11±0.04，P=0.000)。与过表达lncRNA NEAT1组相比，过表达lncRNA NEAT1+LY294002组细胞凋亡率明显升高(9.00%±0.10% vs. 5.13%±0.21%，P=0.004)。结论 lncRNA NEAT1可通过调控PI3K/Akt通路促进Aβ25-35诱导的PC12细胞增殖，抑制PC12细胞凋亡。

来源：2021年第12期

《解放军医学》期刊编辑部

查看解放军医学杂志2021年第12期