解放军医学杂志

作者：李金秋,徐丽秀,朱佳瑜,吐尔逊夏依达·,哈斯木阿仙姑·

单位：新疆医科大学基础医学院/新疆地方病分子生物学重点实验室，乌鲁木齐 836001

关键词：宫颈癌,激活性蛋白激酶C受体1,细胞增殖,细胞凋亡

基金：Natural Science Foundation of Xinjiang Uygur Autonomous Region(2022D01D13)；新疆维吾尔自治区自然科学基金(2022D01D13)；Tianshan Innovation Team Project of Xinjiang Uygur Autonomous Region(2021D14002)；新疆维吾尔自治区天山创新团队项目(2021D14002)

目的 探讨激活性蛋白激酶C受体1(RACK1)对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的机制。方法 收集2020年12月－2021年12月新疆医科大学第一附属医院24例患者的宫颈鳞癌(CSCC)组织及24例无宫颈病变的正常宫颈(NC)组织，采用qRT-PCR检测CSCC和NC组织中RACK1 mRNA的表达水平，并检测CSCC组织中增殖和凋亡相关基因c-myc、caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2 mRNA的表达水平；采用Spearman秩相关分析CSCC组织中RACK1 mRNA与增殖和凋亡相关基因mRNA表达的相关性。采用qRT-PCR及Western blotting检测RACK1在宫颈癌细胞C33a、SiHa和正常宫颈内皮细胞H8中的表达情况。通过慢病毒转染C33a、SiHa细胞以沉默RACK1的表达，根据不同处理分为正常对照组(NC)、空载组(sh-NON)和沉默组1(shRACK1-1)、沉默组2(shRACK1-2)，并验证细胞转染效率，采用MTT法及平板克隆实验检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡水平，qRT-PCR检测RACK1沉默后各组细胞中c-myc、caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2 mRNA的表达水平，Western blotting检测RACK1沉默后各组细胞中c-myc、caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2以及磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)、JAK2、磷酸化细胞信号传导与转录活化因子3(p-STAT3)、STAT3蛋白的表达水平。结果 CSCC组织RACK1 mRNA表达水平明显高于NC组织(P<0.001)。Spearman秩相关分析结果显示，宫颈癌组织中RACK1 mRNA的表达水平与caspase-3(r=–0.679，P<0.001)、caspase-9(r=–0.735，P<0.001)、Bax(r=–0.691，P<0.001) mRNA表达水平呈明显负相关，而与c-myc(r=0.713，P<0.001)、Bcl-2(r=0.846，P<0.001)mRNA表达水平呈明显正相关。qRT-PCR与Western blotting检测结果显示，与H8细胞比较，C33a、SiHa细胞中RACK1 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.001)。RACK1沉默后，与sh-NON组及NC组比较，shRACK1-1组及shRACK1-2组RACK1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.001)。与sh-NON组比较，shRACK1-1组及shRACK1-2组细胞增殖和集落形成能力也明显降低(P<0.001)，而细胞凋亡率明显增高(P<0.001)。此外，与sh-NON组比较，shRACK1-1组及shRACK1-2组caspase-3、caspase-9、Bax mRNA和蛋白表达水平明显增高，p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平明显增高，而c-myc、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.001或P<0.01)。结论 RACK1在宫颈癌组织及细胞中呈现高表达，靶向沉默RACK1基因可有效降低增殖相关蛋白c-myc与抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，但显著增加宫颈癌细胞中凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bax的表达，可能与激活JAK2/STAT3信号通路有关。

来源：2022年第5期

《解放军医学》期刊编辑部

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