解放军医学杂志

作者：祝震亚,童蕾,陆燕群

单位：嘉兴市中医医院骨科，浙江嘉兴 314001

关键词：骨质疏松症,miR-181a,TEN诱导激酶1/帕金森相关基因,自噬,破骨细胞

基金：Zhejiang Medical and Health Science and Technology Plan(2021KY358)；浙江省医药卫生科技计划项目(2021KY358)

目的 探讨miR-181a调控PTEN诱导激酶1(PINK1)/帕金森病相关基因(Parkin)通路对骨质疏松(OP)大鼠破骨细胞线粒体自噬的影响。方法 健康雌性SD大鼠20只，随机分为OP模型组(n=10)与对照组(n=10)。OP模型组大鼠制备OP模型，提取OP大鼠破骨细胞，设置OP组(未转染)、si-miR-181a组(转染si-miR-181a载体质粒)、si-NC组(转染si-NC阴性对照质粒)、ad-miR-181a组(转染ad-miR-181a载体质粒)与ad-NC组(转染阴性ad-NC对照质粒)，对照组大鼠破骨细胞正常培养，设为正常对照组。采用RT-PCR检测miR-181a的表达，MTT法及流式细胞术检测破骨细胞的存活及凋亡情况，透射电镜观察线粒体自噬情况，免疫荧光共定位检测线粒体中Parkin的表达情况，Western blotting检测PINK1/Parkin及自噬、凋亡相关蛋白的表达情况。敲低OP大鼠破骨细胞miR-181a后下调Parkin的表达，验证Parkin对miR-181a的逆转作用。双荧光素酶报告实验验证miR-181a与Parkin的靶向调控关系。结果 与正常对照组相比，OP组破骨细胞中miR-181a(1.59±0.15 vs. 1.02±0.11)、Parkin+TOMM2+(2.02±0.20 vs. 0.13±0.10)、Parkin(1.83±0.18 vs. 1.13±0.10)、PINK1(1.93±0.19 vs. 1.03±0.10)表达水平，自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(1.89±0.18 vs.1.15±0.10)及细胞存活率(157.06%±12.32% vs. 100.09%±0.05%)升高(P<0.05)。与OP组相比，上调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达后，细胞存活率(222.96%±22.15%)升高，Parkin+TOMM2+蛋白表达水平(1.01±0.11)、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(1.36±0.12)及细胞凋亡率(3.28%±0.35%)降低(P<0.05)；下调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达后，细胞存活率(106.96%±10.15%)降低，Parkin+TOMM2+蛋白表达水平(2.97±0.29)、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(2.47±0.24)及细胞凋亡率(19.71%±1.83%)升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示，Parkin为miR-181a的靶基因。下调Parkin的表达可逆转miR-181a低表达发挥的促进线粒体自噬及抑制细胞存活的作用(P<0.05)。结论 上调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达可靶向下调Parkin的表达抑制线粒体自噬激活，促进破骨细胞存活。

来源：2022年第6期

《解放军医学》期刊编辑部

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