解放军医学杂志

作者：赵维维,杨大春,孙雄山,

单位：1西南交通大学医学院，成都 610031 2西部战区总医院心血管内科，成都 610083

关键词：血管平滑肌细胞,肌微管素相关蛋白7,细胞增殖,细胞迁移,再狭窄

基金：National Natural Science Foundation of China(82100419)；国家自然科学基金(82100419)；National Natural Science Foundation of China(81770299)；国家自然科学基金(81770299)

目的 探究肌微管素相关蛋白7(Mtmr7)在小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移中的作用及其机制。方法 培养小鼠主动脉平滑肌细胞系(MOVAS)，用30 ng/ml血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)诱导小鼠VSMCs体外增殖和迁移，采用qRT-PCR和Western blotting分别检测PDGF-BB干预后Mtmr7 mRNA和蛋白表达水平的变化。为探究Mtmr7对小鼠VSMCs增殖和迁移的作用，用Mtmr7基因过表达腺病毒(Ad-Mtmr7)感染VSMCs促使Mtmr7过表达，将MOVAS分为对照组、Ad-Mtmr7组、PDGF-BB组、Ad-Mtmr7+PDGF-BB组4组，采用Ki-67细胞免疫荧光染色、CCK-8法检测VSMCs增殖能力，划痕实验检测VSMCs迁移能力，Western blotting检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)下游靶标蛋白水平。用5 mg/L胰岛素(insulin)恢复mTORC1活性，将MOVAS分为PDGF-BB组、Ad-Mtmr7+PDGF-BB组、Ad-Mtmr7+PDGF-BB+insulin组3组，再次检测上述指标，观察Mtmr7对小鼠VSMCs增殖和迁移的影响。构建小鼠颈动脉内皮损伤模型，造模28 d后，Western blotting检测Mtmr7蛋白表达水平变化。随机将小鼠分为4组(n=10)：假手术组、假手术+Ad-Mtmr7组、颈动脉内皮损伤组、颈动脉内皮损伤+Ad-Mtmr7组。在小鼠手术后立即用Ad-Mtmr7(5×1010 pfu/ml)行颈动脉局部孵育30 min，在造模第7、14、21天行尾静脉注射，以实现体内过表达Mtmr7。造模28 d后，采用HE染色检测各组小鼠颈动脉形态及内膜增生程度。结果 与对照组比较，PDGF-BB组Mtmr7 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.001或P<0.05)，Ki-67阳性细胞率增高，VSMCs相对数量增多(P<0.01或P<0.001)，划痕愈合率增高(P<0.001)，p-S6Ser235/236和p-4EBP1Thr37/46蛋白表达水平升高(P<0.05)；与PDGF-BB组比较，Ad-Mtmr7+PDGF-BB组Ki-67阳性细胞率降低，VSMCs相对数量减少(P<0.01或P<0.001)，划痕愈合率降低(P<0.001)，p-S6Ser235/236和p-4EBP1Thr37/46蛋白表达水平降低(P<0.05)；与Ad-Mtmr7+PDGF-BB组比较，Ad-Mtmr7+PDGF-BB+insulin组p-S6Ser235/236和p-4EBP1Thr37/46蛋白水平升高(P<0.01)，Ki-67阳性细胞率增高，VSMCs相对数量增多(P<0.01或P<0.001)，划痕愈合率增高(P<0.01)。与假手术组比较，颈动脉内皮损伤组Mtmr7蛋白表达水平明显降低(P<0.01)，颈动脉内膜/中膜面积比值增高(P<0.001)；而与颈动脉内皮损伤组比较，过表达Mtmr7后，颈动脉内皮损伤+Ad-Mtmr7组颈动脉内膜/中膜面积比值明显降低(P<0.01)。结论 过表达Mtmr7可抑制PDGF-BB诱导的小鼠VSMCs增殖和迁移，从而减轻血管损伤后的内膜增生，其机制与Mtmr7降低mTORC1活性密切相关。

来源：2022年第6期

《解放军医学》期刊编辑部

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