解放军医学杂志

作者：彭文艺,周喆,王德琼,巨灵翎,张黎,孙雄山,李霜,杨大春,

单位：1西南交通大学医学院，四川成都 610083 2解放军西部战区总医院心血管内科，四川成都 610083

关键词：Yes相关蛋白,糖尿病心肌病,心脏成纤维细胞,心肌成纤维细胞

基金：National Natural Science Foundation of China(81800338)；国家自然科学基金(81800338)

目的 探究Yes相关蛋白(YAP)对高糖诱导的大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖和转分化的影响及其作用机制。方法 分离培养1~3日龄SD大鼠CFs，用40.0 mmol/L葡萄糖诱导CFs，构建糖尿病心肌病(DCM)细胞模型，24 h后检测细胞YAP、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达水平。取原代大鼠CFs，分别设置正常糖(5.5 mmol/L D-Glucose，NG)组、高糖(40.0 mmol/L D-Glucose，HG)组、NG+维替泊芬(NG+VP)组、HG+VP组。VP为YAP抑制剂，剂量为0.5 μmol/L。各组处理CFs 24 h后，采用波形蛋白免疫荧光法鉴定CFs，Ki-67免疫荧光染色检测各组细胞增殖情况，Western blotting 检测各组YAP、α-SMA、collagen Ⅰ、collagenⅢ、CTGF蛋白表达水平。结果 免疫荧光法鉴定波形蛋白阳性，提示原代培养的细胞为大鼠CFs。Ki-67免疫荧光检测结果显示，与NG组比较，HG组CFs的Ki-67阳性率(%)明显升高(67.33±5.14 vs. 22.94±4.88，P<0.05)；YAP抑制剂VP处理后，CFs的Ki-67阳性率(%)降低(46.83±3.86 vs. 67.33±5.14，P<0.05)。Western blotting检测结果显示，与NG组比较，HG组高糖干预24 h后，CFs中α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ的相对表达水平均明显升高(1.43±0.98 vs. 0.93±0.06，1.80±0.09 vs. 1.08±0.09，1.43±0.09 vs. 0.88±0.10，P<0.05)，YAP和CTGF蛋白相对表达水平也升高(1.93±0.15 vs. 1.17±0.09，1.80±0.18 vs. 1.23±0.16，P<0.05)；与HG组比较，HG+VP组的α-SMA、collagen I、collagen Ⅲ、CTGF蛋白相对表达水平均明显降低(1.27±0.06 vs. 1.71±0.12，2.05±0.23 vs. 3.03±0.17，1.10±0.12 vs. 1.82±0.18，1.31±0.16 vs. 1.57±0.03，P<0.05)；与NG组比较，HG+VP组中α-SMA、collagen Ⅰ、CTGF蛋白相对表达水平均较高(P<0.05)。结论 高糖可刺激SD大鼠乳鼠CFs增殖及活化，合成过多的胶原蛋白等细胞外基质，其作用机制可能与YAP/TEAD/CTGF传导通路有关。

来源：2023年第1期

《解放军医学》期刊编辑部

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