解放军医学杂志

作者：张玉月,朱亚飞,高丽娜,殷荷,马朝霞,吴玉珠,王艳华,吴凯,张慧萍,

单位：1宁夏医科大学临床医学院，宁夏银川 750004 2宁夏医科大学总医院产前诊断中心，宁夏银川 750004 3国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室/宁夏血管损伤与修复研究重点实验室，宁夏银川 750004 4宁夏医科大学基础医学院，宁夏银川 750004

关键词：子痫前期,circRNA,细胞增殖,细胞凋亡,miRNAs

基金：Regional Program of the National Natural Science Foundation of China(81760270)；国家自然科学基金地区项目(81760270)；Key Project of Natural Science Foundation of Ningxia(2020AAC02038)；宁夏自然科学基金重点项目(2020AAC02038)；General Program of Natural Science Foundation of Ningx

目的 探讨环状RNA BRAF_2（circRNA BRAF_2）在子痫前期（PE）胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法 收集2018年1月-2019年2月宁夏医科大学总医院正常妊娠与PE孕妇的胎盘组织（n=21），采用qRT-PCR检测两组胎盘组织中circRNA BRAF_2的表达水平，并分析circRNA BRAF_2表达水平与血压的相关性。体外培养人源胎盘滋养细胞株（HTR8-S/Vneo）：（1）将细胞分为对照组与缺氧组，采用qRT-PCR检测circRNA BRAF_2的表达；（2）在HTR8-S/Vneo中转染circRNA BRAF_2慢病毒空载体和过表达慢病毒，分为对照组、circRNA BRAF_2阴性对照组及circRNA BRAF_2过表达组，使用qRT-PCR对circRNA BRAF_2进行过表达验证；（3）在circRNA BRAF_2过表达慢病毒转染成功的基础上，将细胞分为对照组、circRNA BRAF_2阴性对照组、circRNA BRAF_2过表达组、缺氧组、缺氧+circRNA BRAF_2阴性对照组与缺氧+circRNA BRAF_2过表达组，采用EdU和CCK-8法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡水平，Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bcl-2及Bax的表达。采用qRT-PCR检测circRNA BRAF_2在HTR8-S/Vneo细胞质和细胞核中的表达水平，通过生物信息学分析筛选与circRNA BRAF_2可能结合的miRNA并检测其在组织和细胞中的表达水平。结果 与正常妊娠组比较，PE组孕妇胎盘组织中circRNA BRAF_2表达水平明显降低（P<0.001），且circRNA BRAF_2表达水平与收缩压、舒张压呈负相关（r=-0.4531，P<0.01；r=-0.4381，P<0.01）。qRT-PCR检测结果显示，与对照组比较，缺氧组circRNA BRAF_2表达水平明显降低（P<0.01）。circRNA BRAF_2阴性对照组circRNA BRAF_2表达水平与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）；与circRNA BRAF_2阴性对照组比较，circRNA BRAF_2过表达组circRNA BRAF_2表达水平明显升高（P<0.001）。EdU及CCK-8法检测结果显示，与对照组比较，缺氧组EdU阳性细胞百分比明显下降（P<0.001），滋养细胞增殖能力降低（P<0.001）；与缺氧+circRNA BRAF_2阴性对照组比较，缺氧+circRNA BRAF_2过表达组滋养细胞EdU阳性细胞百分比明显升高（P<0.001），滋养细胞增殖能力明显增强（P<0.001）。流式细胞术检测结果显示，与对照组比较，缺氧组细胞凋亡率明显增高（P<0.001）；与缺氧+circRNA BRAF_2阴性对照组比较，缺氧+circRNA BRAF_2过表达组细胞凋亡率明显降低（P<0.001）。Western blotting检测结果显示，与对照组比较，缺氧组caspase-3、caspase-9及Bax蛋白表达水平升高（P<0.01或P<0.001），Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.01）；与缺氧+circRNA BRAF_2阴性对照组比较，缺氧+circRNA BRAF_2过表达组caspase-3、caspase-9及Bax蛋白表达水平降低（P<0.001或P<0.01），Bcl-2蛋白表达水平升高（P<0.05）。qRT-PCR检测结果显示，circRNA BRAF_2主要在细胞质中表达，生物信息学分析结果显示，circRNA BRAF_2与miR-7855-5p存在结合位点。qRT-PCR检测结果显示，与正常妊娠组比较，miR-7855-5p在PE胎盘组织中高表达（P<0.05）；与对照组细胞比较，缺氧组miR-7855-5p明显高表达（P<0.001）。结论 circRNA BRAF_2可促进PE胎盘滋养细胞增殖并抑制其凋亡，作用机制可能与miR-7855-5p有关。

来源：2023年第4期

《解放军医学》期刊编辑部

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