解放军医学杂志

作者：张鲁青,项利迪,缪淳迪,柯孔亮

单位：宁波市杭州湾医院普外科，浙江慈溪 315300

关键词：结直肠癌,circAPLP2,miR-497-5p,成纤维细胞生长因子受体1,侵袭转移

基金：Natural Science Foundation of Ningbo City(202003N4068)；宁波市自然科学基金(202003N4068)

目的 探讨circAPLP2对结直肠癌细胞SW480侵袭与转移的调控作用及其分子机制。方法 采用在线数据库Starbase预测circAPLP2与miR-497-5p的结合位点，TargetScan预测miR-497-5p与FGFR1的结合位点。采用qRT-PCR检测LoVo、DLD1、SW480、SW620、Caco-2、HCoEpiC细胞中circAPLP2、miR-497-5p的相对表达水平，Western blotting检测FGFR1蛋白的相对表达水平。取SW480细胞，设置：（1）siNC组（转染siControl）与sicircAPLP2组（转染sicircAPLP2），采用qRT-PCR检测circAPLP2、miR-497-5p、FGFR1 mRNA的相对表达水平，Western blotting检测FGFR1蛋白的表达；（2）Vector组（转染对照空载质粒）与circAPLP2组（转染circAPLP2过表达质粒），采用qRT-PCR检测miR-497-5p、FGFR1 mRNA的相对表达水平，Western blotting检测FGFR1蛋白的相对表达水平；（3）siNC组（转染阴性对照）、sicircAPLP2组（转染sicircAPLP2）与sicircAPLP2+miR-497-5p inhibitor组（转染sicircAPLP2），采用Transwell实验检测细胞侵袭能力，划痕实验检测细胞迁移能力，Western blotting检测上皮-间质转化（EMT）标志蛋白（E-cadherin、Twist1、N-cadherin、Vimentin）的表达；（4）NC-miRNA组（转染NC-miRNA）、miR-497-5p mimics组（转染miR-497-5p mimics）与NC-inhibitor组（转染NC-inhibitor）、miR-497-5p inhibitor组（转染miR-497-5p inhibitor），采用qRT-PCR和Western blotting检测FGFR1的表达；（5）pcDNA-Control组（转染pcDNA-Control）与pcDNA-FGFR1组（转染pcDNA-FGFR1），采用Western blotting检测FGFR1蛋白的相对表达水平；（6）NC-miRNA组（转染阴性对照）、miR-497-5p mimics组（转染miR-497-5p mimics）与miR-497-5p mimics+pcDNA-FGFR1组（共转染miR-497-5p mimics和pcDNA-FGFR1），采用Transwell实验检测细胞侵袭能力，划痕实验检测细胞迁移能力，Western blotting检测FGFR1和EMT标志蛋白（E-cadherin、Twist1、N-cadherin、Vimentin）的表达。将circAPLP2-WT或circAPLP2-MT报告质粒、FGFR1-WT或FGFR1-MT报告质粒分别与miR-497-5p mimics和circAPLP2共转染SW480细胞48 h，采用荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶的活性。结果 在线数据库Starbase、TargetScan分析结果显示，circAPLP2与miR-497-5p、miR-497-5p与FGFR1存在结合的位点。与人结肠上皮细胞HCoEpiC比较，结直肠癌细胞LoVo、DLD1、SW480、SW620、Caco-2中circAPLP2相对表达水平明显升高，miR-497-5p相对表达水平明显降低，FGFR1蛋白相对表达水平明显升高（P<0.05）。敲低circAPLP2的表达后，与siNC组比较，sicircAPLP2组侵袭细胞数减少（P<0.001），划痕愈合率降低（P<0.001），E-cadherin蛋白表达增加，Twist1、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低（P<0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示，miR-497-5p mimics明显降低了circAPLP2-MT荧光素酶的活性（P<0.001）。miR-497-5p inhibitor可逆转sicircAPLP2对结直肠癌细胞EMT、迁移和侵袭的抑制作用，表现为侵袭细胞数增多（P<0.001），划痕愈合率升高（P<0.01），E-cadherin表达降低，Twist1、N-cadherin、Vimentin蛋白表达增加（P<0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示，miR-497-5p mimics明显降低了FGFR1-MT荧光素酶的活性（P<0.001）。过表达FGFR1可逆转miR-497-5p过表达对结直肠癌细胞迁移和侵袭的抑制作用，表现为侵袭细胞数增多（P<0.001），划痕愈合率升高（P<0.01），E-cadherin表达降低，Twist1、N-cadherin、Vimentin蛋白表达增加（P<0.05）。结论 circAPLP2在结直肠癌细胞中表达水平升高，可能通过竞争性结合miR-497-5p促进FGFR1的表达，从而促进结直肠癌细胞的EMT、侵袭和迁移。

来源：2023年第5期

《解放军医学》期刊编辑部

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