解放军医学杂志

作者：张明,杨经文,李悦,施学智,李华楚,童华生,

单位：1广州医科大学附属第六医院/清远市人民医院重症医学科一区，广东清远 511500 2南部战区总医院重症医学科/解放军热区损伤与组织修复重点实验室，广东广州 510010

关键词：中暑,外泌体,单核细胞,高迁移率族蛋白B1

基金：Medical Research Foundation of Guangdong Province(A2021404)；广东省医学科研基金(A2021404)；Traditional Chinese Medicine Scientific Research Project of the Guangdong Traditional Chinese Medicine Bureau(20212292)；广东省中医药局科研项目(20212292)；Science and Technology Plann

目的 观察热打击单核细胞外泌体高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对内皮细胞炎症的作用。方法 制备中暑大鼠模型，将大鼠分为对照组（n=6）与中暑组（n=6），分离单核细胞提取外泌体并进行鉴定；对外泌体蛋白进行质谱分析并采用注释数据库进行功能描述；采用Western blotting及酶联免疫吸附法（ELISA）分别验证中暑大鼠及患者单核细胞来源外泌体HMGB1的表达变化；将脐静脉内皮细胞（HUVECs）分为对照组、中暑组以及中暑+丙酮酸乙酯（ethyl pyruvate，EP）组，分别添加来自对照组、中暑组大鼠外周血单核细胞上清中提取的外泌体及EP，采用RT-qPCR及Western blotting检测内皮细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）及白细胞介素-1β（IL-1β）的表达水平；采用ELISA检测健康志愿者及中暑患者外泌体NLRP3及IL-1β的表达水平。结果 与对照组比较，中暑组大鼠单核细胞来源外泌体数量（×104/单核细胞）明显增多（11.24±2.66 vs. 1.52±0.21，P<0.001）。蛋白质组学分析表明中暑组外泌体HMGB1表达较对照组上调18.63倍（P<0.001），且在NOD样受体等信号通路富集。Western blotting检测结果显示，中暑组大鼠外泌体内含HMGB1表达量较对照组明显升高（4.13±0.22 vs. 1.00±0.15，P<0.001）。ELISA检测结果显示，中暑组患者外泌体内含HMGB1水平（ng/ml）较对照组明显升高（0.29±0.11 vs. 0.12±0.04，P=0.006）。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示，与对照组比较，中暑组内皮细胞中NLRP3及IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均明显升高，与中暑组比较，中暑+EP组NLRP3及IL-1β的mRNA和蛋白表达水平则明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 热打击可提高单核细胞来源外泌体HMGB1水平，并可能通过HMGB1介导内皮细胞的炎症反应。

来源：2023年第6期

《解放军医学》期刊编辑部

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