解放军医学杂志

作者：程旭,田静,李静,刘青,裴海峰,

单位：1西南交通大学医学院，四川成都 610031 2西部战区总医院心血管内科，四川成都 610083 3解放军第950医院医工科，新疆喀什 844999

关键词：心肌细胞凋亡,缺氧,多核糖核苷酸核苷转移酶1,线粒体外膜转运蛋白70

基金：National Natural Science Foundation of China(81970241)；国家自然科学基金面上项目(81970241)；Key Project of Hospital Management of the General Hospital of Western Theater Command(2021-XZYG-A03)；西部战区总医院院管重点项目(2021-XZYG-A03)

目的 探讨线粒体外膜转位酶70（Tom70）/多核糖核苷酸核苷转移酶1（PNPT1）线粒体转位调控在大鼠心肌细胞缺氧性损伤中的作用及其机制。方法 （1）将大鼠H9C2心肌细胞分为对照组（常氧条件培养12 h）与缺氧组（缺氧干预12 h），采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率，qPCR检测TUBA mRNA表达情况，Western blotting检测PNPT1蛋白表达情况。（2）利用携带Tom70序列的慢病毒载体转染H9C2细胞，分为NC组（慢病毒阴性对照组，转染慢病毒空载体）、Tom70过表达组（转染携带Tom70序列的慢病毒载体）、缺氧+NC组、缺氧+Tom70过表达组，采用Western blotting检测各组Tom70、PNPT1蛋白表达水平，采用流式细胞术检测缺氧+NC组、缺氧+Tom70过表达组细胞凋亡率，qPCR检测缺氧+NC组、缺氧+Tom70过表达组TUBA mRNA表达情况，免疫共沉淀技术检测细胞中Tom70与PNPT1的相互作用情况。结果 （1）流式细胞术检测结果显示，与对照组比较，缺氧组细胞凋亡率明显增高（P<0.05）。qPCR检测结果显示，与对照组比较，缺氧组细胞中TUBA mRNA含量明显减少（P<0.05）。Western blotting检测结果显示，与对照组比较，缺氧组线粒体内PNPT1蛋白表达水平明显降低，而胞质PNPT1蛋白表达水平明显上升（P<0.05）。（2）Western blotting检测结果显示，与对照组和NC组比较，Tom70过表达组细胞内Tom70表达量明显增加（P<0.05）；常氧条件下，NC组与Tom70过表达组线粒体及胞质中的PNPT1表达均无明显差异，而缺氧条件下，与缺氧+NC组比较，缺氧+Tom70过表达组线粒体PNPT1表达水平明显升高，胞质PNPT1表达水平明显降低（P<0.05）。免疫共沉淀结果显示，心肌细胞中的Tom70与PNPT1能够相互结合。流式细胞术检测结果显示，与缺氧+NC组比较，缺氧+Tom70过表达组细胞凋亡率下降（P<0.05）。qPCR检测结果显示，与缺氧+NC组相比，缺氧+Tom70过表达组TUBA mRNA表达水平明显增高（P<0.05）。结论 Tom70可通过调控PNPT1的线粒体定位表达减少凋亡相关mRNA的降解来减轻大鼠心肌细胞缺氧性损伤。

来源：2023年第6期

《解放军医学》期刊编辑部

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