解放军医学杂志

作者：林美佳,雷宇清,叶洲杰,5,朱丽萍,6,王心睿,7,黄雄飞,8,

单位：1福建医科大学基础医学院病理学系，福建福州 350004 2国家卫健委非人灵长类生育调节技术评价重点实验室/福建省妇幼保健院，福建福州 350000 3福建医科大学妇儿临床医学院，福建福州 350004 4福建省儿童医院心脏外科，福建福州 350011 5福建省妇幼保健院，福建福州 350001 6福建省儿童医院，福建福州 350011 7福建医科大学附属医院福建省妇幼保健院医学研究中心，福建福州 350001 8福建医科大学消化道恶性肿瘤教育部重点实验室，福建福州 350108

关键词：肝内胆管癌,异柠檬酸脱氢酶1,细胞迁移,细胞侵袭,转录组

基金：Natural Science Foundation of Fujian Province(2022J01662)；福建省自然科学基金(2022J01662)

目的 探讨异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)在肝内胆管癌(iCCA)细胞HuCCT1增殖与迁移中的作用及其可能的分子机制。方法 采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建IDH1基因敲除的HuCCT1细胞(HuCCT1IDH1-/-)；CCK-8法和克隆形成实验检测IDH1野生型HuCCT1(HuCCT1WT)细胞和HuCCT1IDH1-/-细胞的增殖能力；细胞划痕和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力；Western blotting检测细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平。生物信息学方法分析上述两种HuCCT1细胞的转录组测序结果，Western blotting验证转录组信息通路相关蛋白的表达。结果 与HuCCT1细胞比较，HuCCT1IDH1-/-细胞增殖和克隆形成数目明显减少(P<0.05)，阻滞在G2/M期细胞的比例明显增加(P<0.01)，划痕愈合率明显降低(P<0.01)，迁移细胞数目(P<0.001)和侵袭细胞数目(P<0.05)明显减少；qRT-PCR检测结果显示，HuCCT1IDH1-/-细胞IDH1、Vimentin、MMP-9和调控G2/M期增殖相关基因Cyclin A2、Cyclin B1及CDK1 mRNA表达水平降低(P<0.05)，编码E-cadherin的CDH1 mRNA表达水平升高(P<0.01)；Western blotting检测结果显示，HuCCT1IDH1-/-细胞中E-cadherin表达水平升高(P<0.05)，N-cadherin、Vimentin及MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05)。转录组测序结果显示，HuCCT1WT与HuCCT1IDH1-/-存在1476个差异表达基因(DEGs)；基因本体论(GO)分析显示上述DEGs显著富集在炎症反应、细胞信号转导和细胞代谢等生物学过程；KEGG通路分析显示上述DEGs显著富集在Wnt、MAPK、Rap1、Hippo、TNF等与肿瘤细胞增殖和侵袭转移密切相关的信号通路。Western blotting验证结果显示，与HuCCT1WT比较，HuCCT1IDH1-/-细胞Wnt信号通路的Wnt3a和β-catenin蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 IDH1基因参与调控iCCA细胞HuCCT1的迁移、侵袭及EMT过程，其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

来源：2024年第2期

《解放军医学》期刊编辑部

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