解放军医学杂志

作者：董华平,李鹏,李晓栩,周思敏,肖衡,谢佳新,黄沛,吴玉,钟志凤,

单位：1陆军军医大学高原军事医学系高原作业医学教研室，重庆 400038 2极端环境医学教育部重点实验室，重庆 400038 3全军高原医学重点实验室，重庆 400038

关键词：缺氧,记忆损伤,蛋白酶体抑制剂,酪氨酸羟化酶,泛素赖氨酸48位点

基金：National Natural Science Foundation of China(82001992)；国家自然科学基金(82001992)

目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG132对慢性缺氧所致小鼠记忆功能损伤的作用及其机制。方法 (1)利用低氧工作站构建小鼠中脑多巴胺能神经元MN9D细胞缺氧损伤模型。将MN9D细胞分为常氧组及缺氧12 h、24 h和48 h组，观察缺氧对MN9D细胞中酪氨酸羟化酶(TH)、泛素的K48链(Ub-K48)和Ub-K63表达的影响；将MN9D细胞分为常氧组、缺氧组、缺氧+MG132(25、50、100、200) μmol/L组，观察MG132对缺氧细胞中上述蛋白表达的影响。(2)利用低压舱建立低压缺氧小鼠记忆功能损伤模型。将C57小鼠随机分为常氧组、缺氧3 d组、缺氧21 d组，每组10只，观察低压低氧对小鼠中脑黑质致密部(SNc)TH、Ub-K48和Ub-K63表达的影响；将小鼠随机分为常氧组、缺氧21 d组、缺氧21 d+MG132组，每组8只，观察MG132对缺氧所致小鼠空间记忆损伤的影响。(3)采用Western blotting检测不同缺氧时长及MG132预处理再低氧处理的MN9D细胞中TH、Ub-K48和Ub-K63的蛋白表达水平；采用新物体识别测试检测各组小鼠记忆功能，免疫荧光染色检测SNc区TH阳性免疫反应面积百分比，Western blotting检测小鼠SNc区TH、Ub-K48和Ub-K63表达水平。结果 (1)与常氧组比较，缺氧24 h组MN9D细胞中Ub-K48和Ub-K63表达水平增高(P<0.05)，TH表达水平降低(P<0.05)；各缺氧组Ub-K48/TH和Ub-K63/TH表达水平均增高(P<0.05)。与缺氧组比较，缺氧+MG132 100 μmol/L组和缺氧+MG132 200 μmol/L组MN9D细胞中Ub-K48/TH和Ub-K63/TH表达水平降低(P<0.05)。(2)与常氧组比较，缺氧3 d组和缺氧21 d组小鼠中脑SNc区TH表达水平降低(P<0.001)，Ub-K48/TH和Ub-K63/TH表达水平升高(P<0.05)；缺氧21 d组小鼠新物体识别指数降低(P<0.01)，SNc区多巴胺能神经元TH阳性免疫反应面积百分比降低(P<0.05)。与缺氧21 d组比较，缺氧21 d+MG132组小鼠新物体识别指数升高(P<0.01)。结论 蛋白酶体抑制剂MG132可改善慢性缺氧所致小鼠记忆损伤，其机制可能与抑制Ub-K48和Ub-K63，上调多巴胺能神经元TH表达有关。

来源：2024年第4期

《解放军医学》期刊编辑部

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