解放军医学杂志

作者：王佩佩,岳云,曹丽翠,李宏伟,刘丽,李航鹰,王晓丽,

单位：1银川市第一人民医院中医科，宁夏银川 750004 2中卫市中医院针灸科，宁夏中卫 755000 3宁夏回族自治区人民医院中医科，宁夏银川 750004 4宁夏医科大学药学院，宁夏银川 750004

关键词：枸杞多糖,同型半胱氨酸,肝细胞损伤,DNA甲基化

基金：National Natural Science Foundation of China(222607017)；国家自然科学基金(222607017)

目的 探讨枸杞多糖(LBP)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的小鼠肝细胞损伤的作用及其机制。方法 体外培养正常C3H/An小鼠肝细胞(NCTC 1469)，采用不同浓度的Hcy(0、50、100、200、500 μmol/L)处理NCTC 1469细胞，使用MTT法检测不同浓度Hcy对细胞活性的影响。取对数生长期细胞，设置：(1)对照组(采用10%马血清的DMEM培养基培养)与Hcy组(采用100 μmol/L Hcy溶液处理48 h)，收集细胞。采用细胞活力染色检测细胞凋亡情况，谷草转氨酶(AST)/谷丙转氨酶(ALT)活性检测试剂盒检测AST、ALT活性，RT-qPCR检测YAP1(Yes相关蛋白1)、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRAN的表达，Western blotting检测YAP1蛋白的表达，巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测YAP1启动子区DNA甲基化率。(2)对照组、LBP组、Hcy组与Hcy+LBP组，LBP组采用4 mg/ml LBP溶液处理2 h，Hcy组、Hcy+LBP采用100 μmol/L Hcy溶液处理48 h，46 h时Hcy+LBP组加入4 mg/ml LBP溶液处理，收集细胞。采用RT-qPCR检测YAP1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRAN的表达，Western blotting检测YAP1、Bax、Bcl-2蛋白的表达，AST/ALT活性检测试剂盒检测AST、ALT活性。采用生物信息学方法预测YAP1启动子区DNA甲基化CpG岛。结果 根据MTT法检测结果，选择100 μmol/L Hcy处理NCTC 1469细胞进行后续实验。与对照组比较，Hcy组细胞凋亡率增高(P<0.01)，ALT、AST活性增高(P<0.001)，YAP1 mRAN和蛋白相对表达水平降低(P<0.001)，YAP1启动子区域甲基化率增高(P<0.01)，DNA甲基化酶DNMT1、DNMT3a及DNMT3b mRNA相对表达水平增高(P<0.01或P<0.001)。与Hcy组比较，Hcy+LBP组DNA甲基化酶DNMT1、DNMT3a及DNMT3b mRNA相对表达水平降低(P<0.001)，YAP1 mRAN和蛋白相对表达水平明显增高(P<0.01或P<0.001)，Bcl-2蛋白相对表达水平明显升高(P<0.001)，Bax蛋白相对表达水平明显降低(P<0.001)，ALT、AST活性降低(P<0.001)。结论 YAP1表达降低可能是Hcy诱导的小鼠NCTC 1469细胞损伤的关键过程，YAP1启动子区域甲基化的改变可能是Hcy引起YAP1表达变化的分子机制。LBP可能通过正向调节YAP1的表达改善Hcy引起的小鼠NCTC 1469细胞损伤。

来源：2024年第5期

《解放军医学》期刊编辑部

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