解放军医学杂志

作者：吴高臣,陈金鹏,孟凡剑,王璐璐,缪一奇

单位：苏州市中西医结合医院骨外科，江苏苏州 215101

关键词：XIST,miR-132-3p,椎间盘退变,髓核细胞,增殖,细胞外基质合成

基金：Technology Project of Suzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine(YJ2022026)；苏州中西医结合医院科技项目(YJ2022026)

目的 探讨X染色体失活特异转录本(XIST)对椎间盘退变(IDD)大鼠髓核细胞增殖及细胞外基质合成的影响及其机制。方法 体外分离培养SD大鼠椎间盘髓核细胞，随机分为对照组、模型组、XIST敲低组、空载质粒组、XIST敲低+miR-132-3p敲低组，除对照组外其余各组细胞以白细胞介素(IL)-1β诱导建立IDD细胞模型。分别处理各组椎间盘髓核细胞后，采用qRT-PCR检测大鼠椎间盘髓核细胞中XIST、miR-132-3p的表达；MTS法和EdU染色检测大鼠椎间盘髓核细胞增殖能力；ELISA测定椎间盘髓核细胞培养液中IL-6、IL-18水平；Western blotting检测大鼠椎间盘髓核细胞细胞外基质标志蛋白Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)、蛋白聚糖(Aggrecan)的表达；双荧光素酶报告基因实验检测大鼠椎间盘髓核细胞中XIST对miR-132-3p的靶向调控。采用椎间盘内注射IL-1β诱导建立IDD大鼠模型，分为假手术组、模型组、XIST敲低组、空载质粒组、XIST敲低+miR-132-3p敲低组，每组12只。分别处理各组大鼠后，采用qRT-PCR检测大鼠椎间盘组织中XIST、miR-132-3p的表达；TUNEL染色检测大鼠椎间盘组织髓核细胞凋亡情况；番红O染色观察大鼠椎间盘软骨组织形态；ELISA测定大鼠血清炎性因子IL-6、IL-18水平；Western blotting检测大鼠椎间盘组织中Collagen Ⅱ、Aggrecan的表达。结果 与对照组(细胞)/假手术组(大鼠)相比，模型组大鼠椎间盘髓核细胞及椎间盘组织中XIST表达，椎间盘组织髓核细胞凋亡率，以及椎间盘髓核细胞培养液和血清中IL-6、IL-18水平升高(P<0.05)，髓核细胞活力、增殖率，以及髓核细胞和椎间盘组织中miR-132-3p、Collagen Ⅱ、Aggrecan蛋白表达降低(P<0.05)；与模型组相比，XIST敲低组大鼠椎间盘组织髓核细胞凋亡率，椎间盘髓核细胞培养液和血清中IL-6、IL-18水平，以及髓核细胞和椎间盘组织中XIST的表达降低(P<0.05)，髓核细胞活力、增殖率，以及髓核细胞和椎间盘组织中miR-132-3p、Collagen Ⅱ、Aggrecan蛋白表达升高(P<0.05)；下调miR-132-3p可减弱敲低XIST对IL-1β诱导的椎间盘损伤和软骨基质流失的改善作用。XIST可靶向下调大鼠髓核细胞中miR-132-3p的表达。结论 敲低XIST可能通过上调miR-132-3p而抑制炎症，从而抑制IDD髓核细胞凋亡，促进其增殖及细胞外基质合成。

来源：2024年第7期

《解放军医学》期刊编辑部

查看解放军医学杂志2024年第7期