解放军医学杂志

作者：谢柯欢,张浩军,谭睿陟,粟宏伟,刘鹏,李平,王丽,

单位：1西南医科大学附属中医医院中西结合研究中心，四川泸州 646000 2北京中日友好医院临床医学研究所，北京 100029 3西南医科大学附属中医医院泌尿外科，四川泸州 646000 4北京顺义区中医医院肾病科，北京 101320

关键词：柴黄益肾颗粒,肾纤维化,Wnt/β-catenin信号通路

基金：National Natural Science Foundation of China(82274489)；国家自然科学基金(82274489)；National Natural Science Foundation of China(81904174)；国家自然科学基金(81904174)；Sichuan Science and Technology Program(2022YFS0621)；四川省科技计划资助项目(2022YFS0621)

目的 探讨柴黄益肾颗粒对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化的作用及其机制。方法 将24只8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、模型组及柴黄益肾颗粒低、高剂量组(n=6)。对照组仅暴露且游离右侧肾输尿管；模型组行UUO建立UUO动物模型；柴黄益肾颗粒低、高剂量组按模型组方法建立UUO小鼠模型并分别予以3.8、7.6 g/kg柴黄益肾颗粒灌胃，7 d后麻醉处死小鼠收集肾标本。采用HE、Masson染色观察肾脏病理变化及纤维化程度，天狼星红染色观察胶原沉积情况。采用Western blotting检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)相关蛋白的表达水平。采用RT-PCR检测A33及GSK-3β、β-catenin mRNA水平的变化。同时，以正常小鼠肾小管上皮细胞(TCMK1)作为正常组，并利用转化生长因子-β(TGF-β)刺激TCMK1建立体外纤维化模型，柴黄益肾颗粒含药血清处理建立体外用药模型；并通过转染A33过表达质粒在TCMK1细胞内过表达A33，观察纤维化相关指标及A33及GSK-3β、β-catenin mRNA的表达变化。结果 RT-PCR检测结果显示，与对照组比较，模型组A33水平明显升高，而柴黄益肾颗粒高、低剂量组明显降低(P<0.05)。Western blotting检测结果显示，模型组α-SMA、FN、Col-Ⅰ等纤维化相关因子的表达水平明显高于对照组(P<0.05)；与模型组比较，柴黄益肾颗粒低、高剂量组α-SMA、FN、Col-Ⅰ的表达水平明显降低(P<0.05)。HE、Masson、免疫组化染色结果显示，与对照组比较，模型组肾脏结构损伤严重，胶原沉积明显增加，且GSK-3β、β-catenin蛋白表达水平明显升高(P<0.01)；与模型组比较，柴黄益肾颗粒低、高剂量组肾脏结构良好，肾脏损伤及纤维化均明显好转，GSK-3β、β-catenin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。体外实验结果证实，与正常组比较，A33过表达可促进TCMK1细胞纤维化相关因子的上调，明显增加Wnt/β-catenin信号通路下游靶点GSK-3β和β-catenin mRNA的表达(P<0.05)，且A33过表达可逆转柴黄益肾颗粒含药血清下调的细胞纤维化改变(P<0.01)。结论 柴黄益肾颗粒可通过下调A33/Wnt/β-catenin信号通路明显减缓UUO小鼠肾纤维化，且A33可能是肾纤维化的一个潜在治疗靶标。

来源：2024年第7期

《解放军医学》期刊编辑部

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