解放军医学杂志

作者：林正霄,徐朝霞,陈娟,胡健,祝国芸,朱忠立,冯健,李福祥,

单位：1西南交通大学医学院，四川成都 611756 2西部战区总医院重症医学科，四川成都 610083 3西部战区总医院急诊医学科，四川成都 610083

关键词：重症监护病房获得性衰弱,骨骼肌萎缩,miR-34a,沉默调节蛋白1,萎缩相关基因1,肌肉环指蛋白1

基金：Scientific Research Project of Cadre Health Care in Sichuan Province(2022-1303)()；四川省干部保健科研课题(川干研2022-1303)()；Military Medical Research Project of General Hospital of Western Theater Comm(2019LH05)；西部战区总医院军事医学科研项目(2019LH05)

目的 探讨miR-34a/SIRT1在重症监护病房获得性衰弱(ICU-AW)中的作用及其机制。方法 (1)诱导C2C12小鼠骨骼肌细胞分化成肌管，并分为ICU-AW模型组[ICU-AW组，用脂多糖(LPS)干预12 h]与正常对照组(等量无菌水干预12 h)。采用Western blotting检测两组肌肉环指蛋白1(MuRF-1)、萎缩相关基因1(Atrogin-1)蛋白、沉默调节蛋白1(SIRT1)表达水平，RT-qPCR检测两组微小核糖核酸-34a(miR-34a)及MuRF-1、Atrogin-1、SIRT1 mRNA的表达水平，并在光镜下观察两组小鼠C2C12骨骼肌细胞生长及分化情况。(2)将ICU-AW细胞分为对照组(siRNA的转染剂干预)、Scra siRNA组(转染剂和非特异性siRNA干预)、miR-34a siRNA组(miR-34a siRNA转染剂和特异性siRNA干预)、Vehicle组(SIRT1激动剂的溶剂二甲基亚砜干预)及SRT1720组(SIRT1激动剂SRT1720干预)。采用Western blotting检测各组SIRT1、Atrogin-1、MuRF-1蛋白表达水平，RT-qPCR检测各组miR-34a及MuRF-1、Atrogin-1、SIRT1 mRNA表达水平。(3)将ICU-AW细胞分为对照组(miR-34a siRNA的转染剂干预)、miR-34a siRNA组(转染剂和特异性siRNA干预)、miR-34a siRNA+Vehicle组(转染剂、特异性siRNA和二甲基亚砜干预)及miR-34a siRNA+EX-527组(转染剂、特异性siRNA和SIRT1抑制剂EX-527干预)，采用Western blotting检测并比较各组Atrogin-1、MuRF-1蛋白表达水平，RT-qPCR检测并比较各组Atrogin-1、MuRF-1 mRNA表达水平。结果 光镜下可见第4天C2C12小鼠骨骼肌细胞肌管分化形成，与正常对照组比较，ICU-AW组肌管明显萎缩。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示，与正常对照组比较，ICU-AW组Atrogin-1、MuRF-1 mRNA及蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05)，miR-34a相对表达水平明显升高(P<0.001)，SIRT1 mRNA及蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01)。RT-qPCR检测结果显示，与对照组(转染剂干预)比较，miR-34a siRNA组的miR-34a及Atrogin-1、MuRF-1 mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01或P<0.001)，SIRT1 mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.01)；与Vehicle组比较，SRT1720组SIRT1 mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05)，而Atrogin-1、MuRF-1 mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05)。与miR-34a siRNA组比较，Scra siRNA组miR-34a及Atrogin-1、MuRF-1 mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05、P<0.01或P<0.001)，而SIRT1 mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01)。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示，与miR-34a siRNA+Vehicle组比较，miR-34a siRNA+EX-527组Atrogin-1、MuRF-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论 ICU-AW状态下miR-34a过度激活，通过抑制SIRT1的表达导致骨骼肌萎缩，可能在ICU-AW发病过程中起重要作用。

来源：2024年第7期

《解放军医学》期刊编辑部

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