解放军医学杂志

作者：石雨鹭,康权,岳小涵,罗庆,

单位：1重庆医科大学附属儿童医院/国家儿童健康与疾病临床医学研究中心/儿童发育疾病研究教育部重点实验室/儿科学重庆市重点实验室，重庆 400014 2川北医学院附属医院儿科，四川南充 637000 3重庆医科大学附属儿童医院普通外科创伤外科，重庆 400014

关键词：骨肉瘤细胞,亮氨酸拉链-EF-hand跨膜蛋白1,细胞增殖,细胞迁移,凋亡,细胞分化

基金：National Natural Science Foundation of China(81172545)；国家自然科学基金(81172545)；Natural Science Foundation of Chongqing(cstc2020jcyj-msxmX0113)；重庆市自然科学基金(cstc2020jcyj-msxmX0113)

目的 探讨亮氨酸拉链-EF-hand跨膜蛋白1(LETM1)对人骨肉瘤MG63及143B细胞增殖、迁移、凋亡、成骨分化及体内成瘤的作用及其机制。方法 将骨肉瘤MG63及143B细胞分为空白对照组(未加入腺病毒感染)、阴性对照组(sh-NC组，用RNAi阴性对照病毒感染)及LETM1敲低组(sh-LETM1组，用sh-LETM1腺病毒感染)。采用Western blotting检测各组LETM1蛋白在健康人成骨细胞hFOB1.19及骨肉瘤细胞中的表达水平，以验证腺病毒敲低效果；细胞克隆形成实验及CCK-8法检测细胞增殖情况；划痕愈合实验及Transwell实验检测细胞迁移情况；DAPI染色法及Annexin V-APC/7-AAD流式细胞术双染法检测细胞凋亡情况；碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红S染色检测细胞的早期及晚期成骨分化情况。将10只裸鼠分为sh-NC组(n=5，以RNAi阴性对照病毒感染的143B细胞注入裸鼠皮下)与sh-LETM1组(n=5，以sh-LETM1腺病毒感染的143B细胞注入裸鼠皮下)，并采用裸鼠皮下成瘤实验检测各组细胞的体内成瘤能力。结果 Western blotting检测结果显示，LETM1蛋白在骨肉瘤MG63及143B细胞中的表达明显高于健康人成骨细胞hFOB1.19(P<0.05)，sh-LETM1腺病毒感染MG63及143B细胞后明显降低了LETM1蛋白的表达。细胞克隆形成实验及CCK-8法检测结果显示，在MG63及143B骨肉瘤细胞中，sh-LETM1组较sh-NC组及空白对照组的克隆形成能力及增殖能力明显降低(P<0.01)。Wound-healing实验及Transwell实验结果显示，在MG63及143B骨肉瘤细胞中，sh-LETM1组较sh-NC组及空白对照组的细胞迁移率明显降低(P<0.01)。DAPI染色及流式细胞术结果显示，在MG63及143B骨肉瘤细胞中，sh-LETM1组较sh-NC组的细胞凋亡率明显增高(P<0.01)。ALP染色及茜素红S染色实验结果显示，在MG63及143B骨肉瘤细胞中，sh-LETM1组较sh-NC组及空白对照组染色区域及钙盐结节增多。裸鼠皮下成瘤实验结果显示，143B sh-LETM1组较143B sh-NC组细胞的皮下成瘤能力降低。结论 LETM1可促进MG63和143B骨肉瘤细胞的增殖、迁移及体内成瘤，其机制可能与抑制细胞凋亡及成骨分化有关。

来源：2024年第10期

《解放军医学》期刊编辑部

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