解放军医学杂志

作者：黑俊如,王翠,宋梦文,谢胜强,王秉贤,兰晓娟,张涵博,程岗,刘志强,杨锡琴,张剑宁,

单位：1解放军医学院，北京 100853 2解放军总医院第一医学中心神经外科医学部，北京 100853 3军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所，北京 100850 4解放军总医院第六医学中心神经外科，北京 100048

关键词：透明质酸,基质金属蛋白酶,脑源性神经营养因子,创伤性脑损伤,控释

目的 研制以透明质酸(HA)为基质的基质金属蛋白酶(MMP)响应性脑源性神经营养因子(BDNF)控释材料，以期为创伤性脑损伤(TBI)的干预及损伤修复提供新的治疗方案。方法 HA经过氨基化处理后，与Sulfo-SMCC羧基缩合成酰胺，再与谷胱甘肽(GSH)连接，合成HA-GSH；通过分子克隆技术经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切，DNA测序后构建谷胱甘肽S转移酶(GST)-金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-BDNF表达质粒，在大肠埃希菌原核表达系统中诱导表达GST-TIMP-BDNF重组蛋白，采用离子交换层析分离纯化，Western blotting验证纯化后的重组蛋白；在MMP稀释液中分别加入PBS、MMP抑制剂Marimastat和不同浓度(0.4、0.6、0.8 mg/ml)的GST-TIMP-BDNF或GST-BDNF，采用MMP活性检测试剂盒检测不同组别MMP-2的活性，评价该重组蛋白对MMP的抑制作用。提取大鼠原代神经元，培养后建立谷胱甘肽过氧化物酶4抑制剂(RSL3)诱导神经元铁死亡模型，采用免疫荧光染色检测GST-TIMP-BDNF对神经元损伤的影响。结果 MRI氢谱鉴定结果显示，成功合成了HA-GSH；Western blotting检测结果显示，利用大肠埃希菌原核表达系统成功表达了含GST标签的重组蛋白GST-TIMP-BDNF；MMP活性检测结果显示，重组蛋白GST-TIMP-BDNF对MMP-2活性的抑制作用优于GST-BDNF(P<0.05)；免疫荧光染色结果显示，RSL3处理后加入重组蛋白GST-TIMP-BDNF的大鼠神经元荧光强度明显增高(P<0.05)。结论 成功研制了一种MMP响应性HA基体BDNF控释材料，对神经元损伤具有一定的保护作用。

来源：2024年第11期

《解放军医学》期刊编辑部

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