解放军医学杂志

作者：周鑫,范昊,王安,秦嘉沛,白怡冰,马志强,胡毅,

单位：1解放军医学院，北京 100853 2解放军总医院第五医学中心肿瘤医学部肿瘤内科，北京 100071 3解放军总医院第二医学中心心血管内科，北京 100853 4空军军医大学第二附属医院胸外科，陕西西安 710032

关键词：DNA甲基转移酶3a,肺鳞状细胞癌,预后,细胞增殖,细胞迁移

基金：National Natural Science Foundation of China(82103508)；国家自然科学基金项目(82103508)；Chinese PLA General Hospital Youth Independent Innovation Science Fund Project(220NCZ033)；解放军总医院青年自主创新科学基金项目(220NCZ033)

目的 探讨DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)表达与肺鳞癌预后的相关性及其介导肺鳞癌进展的潜在分子机制。方法 收集2009年5月－2014年1月于空军军医大学第二附属医院胸外科行手术治疗的47例肺鳞癌患者进行回顾性分析。采用免疫组织化学染色检测DNMT3a在肺鳞癌组织与癌旁组织中的表达，根据肺鳞癌中DNMT3a免疫组化评分中位数分为DNMT3a高表达组(n=25)与DNMT3a低表达组(n=22)，结合临床病理信息与公共生物信息学数据库进行预后相关性分析。为探索DNMT3a介导肺鳞癌进展的分子机制，采用慢病毒感染法构建DNMT3a过表达的肺鳞癌H1703细胞系，设置DNMT3a过表达组与对照组，采用功能表型实验检测两组细胞增殖、迁移的差异。构建DNMT3a过表达的裸鼠皮下肿瘤异种移植模型，设置DNMT3a过表达组与对照组(n=3)，观察两组皮下移植瘤的生长。Western blotting检测两组细胞与两组皮下移植瘤中相关蛋白的表达。功能回复实验先采用c-Myc抑制剂(10058-F4)处理DNMT3a过表达细胞，EdU增殖染色实验检测细胞增殖；再采用RNAi-锌指E盒结合同源框1(ZEB1)慢病毒感染DNMT3a过表达细胞敲低ZEB1表达，Transwell迁移实验检测细胞迁移。采用DNMT特异性抑制剂(SGI-1027)处理DNMT3a过表达组与对照组细胞，观察抑制DNMT3a后的细胞增殖及迁移。结果 免疫组化染色结果显示，肺鳞癌中DNMT3a免疫组化评分明显高于癌旁组织(P<0.0001)。DNMT3a高表达与N分期、TNM分期、肿瘤分化程度等密切相关(P<0.05或P<0.01)，DNMT3a高表达是肺鳞癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。功能表型实验表明，DNMT3a过表达组的克隆形成数、Edu阳性细胞比例、细胞迁移率、细胞迁移数均高于对照组(P<0.05)。DNMT3a过表达组裸鼠皮下移植瘤体积与重量明显高于对照组(P<0.001)。Western blotting检测结果显示，DNMT3a过表达组细胞与皮下移植瘤的c-Myc、ZEB1蛋白表达量明显高于对照组(P<0.05)。功能回复实验表明，10058-F4处理DNMT3a过表达组细胞EdU阳性细胞比例明显降低(P<0.05)；慢病毒敲低ZEB1后，DNMT3a过表达组细胞迁移数明显减少(P<0.05)，而DNMT3a蛋白的表达则无明显变化(P>0.05)。此外，SGI-1027抑制DNMT3a表达后，DNMT3a过表达组与对照组克隆形成数及细胞迁移率均明显降低(P<0.05)。结论 DNMT3a高表达是肺鳞癌患者预后不良的独立危险因素；DNMT3a可能通过上调c-Myc表达增强肺鳞癌的增殖能力，上调ZEB1表达增强肺鳞癌的迁移能力。

来源：2024年第12期

《解放军医学》期刊编辑部

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