解放军医学杂志

作者：卢冠军,汪乐新,赵静,刘超,熊建团,焦运,杨安宁,姜怡邓,田宇佳,徐遥琴,石青,刘莉,张亚兰,白志刚5,李淑娟,6,

单位：1宁夏医科大学总医院泌尿外科，宁夏银川 750004 2宁夏医科大学第一临床医学院，宁夏银川 750004 3国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室，宁夏银川 750004 4绍兴复康护理院，浙江绍兴 312000 5宁夏回族自治区人民医院检验科，宁夏银川 750004 6宁夏医科大学总医院急诊科，宁夏银川 750004

关键词：足细胞自噬,同型半胱氨酸,瞬时感受电位通道6

基金：National Natural Science Foundation of China(82060139)；国家自然科学基金(82060139)；National Natural Science Foundation of China(81900273)；国家自然科学基金(81900273)；Key Research and Development Project of Ningxia Hui Autonomous Region(2020BFH02003)；宁夏回族自治区重点研发计划(2020

目的 探讨在同型半胱氨酸(Hcy)作用下瞬时感受电位通道6(TRPC6)对小鼠肾脏足细胞自噬的调控作用。方法 将小鼠肾脏足细胞分为对照组与Hcy组(40、60、80、100 μmol/L的Hcy刺激48 h)，采用qRT⁃PCR检测TRPC6 mRNA水平，筛选出Hcy的最佳浓度后，后续均以此浓度进行实验。采用Western blotting检测自噬相关蛋白LC3 Ⅱ、p62，以及足细胞结构蛋白Nephrin、Podocin的表达水平；采用qRT-PCR、Western blotting及免疫荧光检测两组TRPC6 mRNA及蛋白的表达水平。转染过表达或干扰TRPC6的细胞分别设置为：(1)对照组(不做处理)、TRPC6过表达阴性对照组、TRPC6过表达组；(2)对照组(不做处理)、TRPC6干扰阴性对照组和TRPC6干扰组(si-1、si-2、si-3)，并采用qRT⁃PCR检测TRPC6表达水平。再将过表达或干扰TRPC6后的细胞分别设置为：(1)对照组(不做处理)、Hcy组(加入80 μmol/L Hcy)、TRPC6过表达对照+Hcy组、TRPC6过表达+Hcy组；(2)对照组(不做处理)、Hcy组、TRPC6干扰对照+Hcy组、TRPC6干扰+Hcy组，并采用Western blotting检测p62、LC3 Ⅱ、TRPC6蛋白的表达水平。结果 qRT⁃PCR检测结果显示，与对照组比较，TRPC6 mRNA表达水平随Hcy浓度增加而升高，其中80 μmol/L Hcy干预后的表达水平最高，因此将80 μmol/L作为Hcy的最佳干预浓度。此时，自噬相关蛋白LC3 Ⅱ的表达水平升高、p62表达水平降低(P<0.05)。Western blotting检测结果显示，与对照组比较，Hcy组中足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin的表达水平明显降低(P<0.05)。qRT⁃PCR检测结果显示，与对照组比较，Hcy组中TRPC6 mRNA表达水平明显升高(P<0.05)；与TRPC6过表达阴性对照组比较，TRPC6过表达组的TRPC6 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)；与TRPC6干扰阴性对照组比较，TRPC6干扰组的TRPC6 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。Western blotting检测结果显示，与TRPC6过表达对照组相比，TRPC6过表达+Hcy组中自噬相关蛋白LC3 Ⅱ表达水平明显升高，p62表达水平明显降低(P<0.05)；与TRPC6干扰对照+Hcy组相比，TRPC6干扰+Hcy组中自噬相关蛋白LC3 Ⅱ表达水平明显降低，p62表达水平明显升高(P<0.05)。结论 Hcy可诱导小鼠肾脏足细胞自噬，抑制TRPC6的表达可明显减轻足细胞的自噬性损伤。

来源：2024年第12期

《解放军医学》期刊编辑部

查看解放军医学杂志2024年第12期