解放军医学杂志

作者：兰晓娟,谢胜强,王秉贤,马文静,5,陈巧汨,6,程岗,吕文英,张剑宁,

单位：1安徽医科大学第五临床医学院海军临床学院，安徽合肥 230032 2解放军总医院第六医学中心神经外科，北京 100048 3解放军总医院第一医学中心神经外科医学部，北京 100853 4军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所，北京 100850 5南华大学衡阳医学院，湖南衡阳 421001 6安徽医科大学基础医学院，安徽合肥 230032

关键词：间充质干细胞,分泌组物,海水浸泡,创伤性脑损伤

基金：National Natural Science Foundation of China(T2394483)；国家自然科学基金(T2394483)

目的 探究三维培养的间充质干细胞(MSCs)来源的分泌组物对海水浸泡(SW)合并拉伸损伤(SI)小鼠海马神经元的保护作用，为SW合并创伤性脑损伤(TBI)后的神经元修复提供新思路。方法 采用悬滴法培养MSCs，收集含有MSCs来源的分泌组物的条件培养基(CM)。采用小鼠海马神经元(HT22细胞)建立SW合并SI细胞模型。将HT22细胞随机分为对照组、SI组、SI+SW组、SI+CM组与SI+SW+CM组。采用CCK-8法检测各组细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡率，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、铁死亡相关蛋白长链酰基辅酶A合酶4(ACSL4)、环氧合酶-2(COX-2)的表达水平。结果 15%浓度海水浸泡12 h后，HT22细胞活力明显下降(P<0.05)。CCK-8法检测结果显示，处理12 h后，与对照组比较，SI组和SI+SW组HT22细胞活力均明显下降(P<0.0001)；经MSCs分泌组物的CM处理后，SI+CM组细胞活力明显高于SI组(P<0.0001)，且SW+SI+CM组细胞活力明显高于SI+SW组(P<0.001)。流式细胞术检测结果显示，SI组和SI+SW组细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05或P<0.001)，而SI+CM组细胞凋亡率明显低于SI组(P<0.05)，SI+SW+CM组细胞凋亡率明显低于SI+SW组(P<0.05)。Western blotting检测结果显示，与对照组比较，SI组和SI+SW组Bcl-2表达水平明显降低(P<0.01或P<0.0001)，Bax、ACSL4和COX-2表达水平明显升高(P<0.01或P<0.001或P<0.0001)；与SI组比较，SI+CM组Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)，而Bax、ACSL4和COX-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)；与SI+SW组比较，SI+SW+CM组Bcl-2表达水平明显升高(P<0.01)，Bax、ACSL4和COX-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01或P<0.001)。细胞划痕实验结果显示，12 h和24 h时，SI组和SI+SW组细胞迁移率明显低于对照组(P<0.01或P<0.0001)，而SI+CM组细胞迁移率明显高于SI组(P<0.0001或P<0.01)，SI+SW+CM组细胞迁移率明显高于SI+SW组 (P<0.0001)。结论 悬滴法培养的MSCs分泌组物可减轻SW合并SI神经元的损伤，有望成为SW合并TBI的潜在治疗措施。

来源：2025年第3期

《解放军医学》期刊编辑部

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