解放军医学杂志

作者：王晓娜,龚秀莹,赵苗苗,刘清华,李勇,王坤,尹崇高,李洪利,

单位：1山东第二医科大学基础医学院临床病理系，山东潍坊 261053 2山东第二医科大学人体解剖学教研室，山东潍坊 261053 3山东第二医科大学医学研究实验中心，山东潍坊 261053 4山东第二医科大学护理学院，山东潍坊 261053

关键词：肺腺癌,miR-185-5p,TM9SF1,增殖,迁移,自噬

基金：National Natural Science Foundation of China(82373043)；国家自然科学基金(82373043)；Natural Science Foundation of Shandong Province(ZR2022MH311)；山东省自然科学基金(ZR2022MH311)；Shandong Province Traditional Chinese Medicine Science and Technology Project(Q-2023012)；山东省

目的 探讨miR-185-5p靶向负调控跨膜9超家族蛋白1(TM9SF1)对肺腺癌细胞增殖、迁移和自噬能力的影响。方法 在基因表达综合数据库(GEO)中下载数据集GSE51853，分析miR-185-5p在肺腺癌组织中的表达情况。采用在线数据库miRTargetLink、miRTarbase和DIANA-microT-CD预测miR-185-5p靶向结合的蛋白，使用HADb网站下载自噬相关蛋白，将4个数据库所得结果取交集，通过StarBase数据库分析交集结果VEGFA和TM9SF1的生存曲线。分别将TM9SF1 3'UTR(WT)或TM9SF1 3'UTR(MUT)报告质粒与miR-185-5p对照质粒(CON)或miR-185-5p过表达质粒(over-miR-185-5p)共转染HEK-293T细胞，采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-185-5p与TM9SF1的结合位点及荧光素酶活性。采用Western blotting检测转染miR-185-5p过表达质粒后A549细胞中TM9SF1蛋白的表达情况。将A549细胞分为3组：(1)CON+NC组，转染miR-185-5p对照质粒和TM9SF1对照质粒；(2)over-miR-185-5p+NC组，转染miR-185-5p过表达质粒和TM9SF1对照质粒；(3)over-miR-185-5p+over-TM9SF1组，转染miR-185-5p过表达质粒和TM9SF1过表达质粒。采用EdU细胞增殖实验、划痕实验和Transwell迁移实验验证miR-185-5p靶向结合TM9SF1对肺腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。分别采用stubRFP-sensGFP-LC3自噬流检测慢病毒和JC-1实验检测肺腺癌细胞自噬流和线粒体膜电位(MMP)的改变。结果 GSE51853数据集中，miR-185-5p在肺腺癌组织中的表达水平明显低于正常肺组织(P<0.01)；qRT-PCR检测结果显示，miR-185-5p在肺腺癌细胞NCI-H1299、A549中的表达水平低于正常肺上皮细胞BEAS-2B(P<0.01)。在线数据库miRTargetLink、miRTarbase、DIANA-microT-CD和HADb预测结果显示，miR-185-5p可靶向调控自噬相关蛋白TM9SF1。双荧光素酶报告基因实验和Western blotting检测结果分别显示，miR-185-5p可直接与TM9SF1 mRNA的3'UTR区结合，过表达miR-185-5p后靶蛋白TM9SF1的表达水平降低(P<0.05)。EdU细胞增殖实验、划痕实验和Transwell迁移实验结果显示，过表达miR-185-5p可抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移能力，过表达TM9SF1能够削弱miR-185-5p对肺腺癌细胞增殖、迁移能力的抑制作用(P<0.05)。stubRFP-sensGFP-LC3自噬流检测慢病毒结果显示，过表达miR-185-5p后A549细胞中自噬流加快，而同时过表达miR-185-5p和TM9SF1后A549细胞中自噬流减慢；JC-1实验结果显示，过表达miR-185-5p后A549细胞中MMP水平降低，同时过表达miR-185-5p和TM9SF1后A549细胞中MMP水平升高。结论 miR-185-5p可能通过靶向负调控TM9SF1的表达影响肺腺癌细胞的增殖、迁移和自噬能力。

来源：2025年第5期

《解放军医学》期刊编辑部

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